核酸污染去除剂

背景知识

由于核酸检测步骤较多，且多个环节样本直接暴露于空气中，任何一个环节 出现一点小纰漏就容易导致整个实验室的污染。即使严格按照规程操作，核酸污染依然无法彻底避免。

核酸污染主要体现在样本核酸或扩增产物在台面、设备、检测人员表面的核酸残留，以及扩 增产物形成的气溶胶。气溶胶由于颗粒较小，若不做处理可长期漂浮在空气中持续影响实验室的检测。针对固体表面的核酸残留，很多实验室采用75%乙醇或84 消毒液进行擦拭处理。针对空气中的气溶胶污染，很多实验室选择乙醇喷雾使核酸沉降然后配合84消毒液处理地面及台面，但效果不是太理想。因此迫切需要研发一种能够快速将核酸气溶胶沉降的物质，将悬浮在空气中的核酸进行沉降，然后配合84消毒液处理地面及台面。

原理

采用大分子吸附络合原理吸附空气中的气溶胶，形成不溶物，并配合酶水解核酸片段，可有效的将存在与液体、空气、物表上的核酸去除干净。

效果评价

1) 84 消毒液和核酸污染去除剂可有效清除溶液中核酸

为验证不同试剂对于溶液中核酸的清除效果，将5种不同试剂分别与RNA或DNA 溶液混合，琼脂糖凝胶电泳鉴定核酸残留。结果显示，84消毒液和核酸污染去除剂能够将溶液中的 RNA (图 1A) 或 DNA (图 1B) 完全清除干净，DNA AWAY(ThermoFisher 公司核酸去除剂) 只能部分清除，洗涤剂对于核酸无影响。另外，核酸污染去除剂 处理的样本电泳时在点样孔中可见核酸条带，离心处理后核酸条带消失。提示核酸污染去除剂与溶液中的核酸形成了不溶物，与该产品的核酸清除原理符合。84消毒液处理的样本不管离心与否均未见到核酸条带，提示溶液中核酸已降解。

图 1 琼脂糖电泳鉴定不同试剂对溶液中RNA和DNA的清除效果

2）84消毒液和核酸污染去除剂可清除固体表面核酸

为验证不同试剂对于塑料、玻璃和金属表面核酸残留的清除效果，将阳性PCR产物滴在不同 材质上晾干模拟核酸残留，分别用 5 种不同试剂对3种材质表面的核酸残留进行去除操作，然后采集处理点的残留核酸进行荧光PCR 鉴定。结果显示，84消毒液和 核酸污染去除剂能够较好地清除掉不同材质表面的核酸残留，DNA AWAY也对核酸残留具有一定清除效果，但稍逊于前两种试剂，而水和乙醇结果相似，均不能明显去除核酸残留，仅比对照组Ct值略高。另外，金属表面的核酸残留最容易被清除干净，玻璃次之，塑料表面的核酸残留最不易被清除干净 (图2)。提示塑料材质实验台表面的核酸残留要多次清理才能达到预期，可考虑将两种试剂交替使用以达到最好的处理效果，另外建议在金属台面进行核酸检测相关操作。

图 2 荧光PCR鉴定不同材质表面核酸残留去除效果

3）核酸污染去除剂配合84消毒液可清除模拟核酸气溶胶污染

实验室的核酸气溶胶极难清除干净，为了获得一种有效的清除气溶胶污染的方案，本研究在密闭超净工作台内雾化阳性 PCR 产品，模拟了核 酸气溶胶污染。然后分别测试了单独使用84消毒液或核酸污染去除剂，以及75%乙醇/84消毒液或核酸污染去除剂/84消毒液的复合处理方案。结果显示，未处理组荧光PCR Ct值为27.21，说明密闭工作台内模拟气溶胶污染已经非常严重，超过了一般实验室核酸污染的程度 (Ct 值≥33)。单独使用84消毒液处理一次，PCR Ct值仅提高到29.72，提示其仅能部分去除气溶胶污染；单独使用核酸污染去除剂处理一次能明显去除气溶胶污染，PCR Ct值提高至34.78，但仍有微量残留；75%乙醇/84消毒液复合方案也能明显地除气溶胶污染，PCR Ct值提高至32.86，还有少量残留，且去除效果略逊于单独使用核酸污染去除剂；核酸污染去除剂/84消毒液复合方案仅处理一次就完全将超净工作台内的高 浓度气溶胶污染清除干净，提示该方案可用于实验室核酸气溶胶污染的清除 (图 3)。

图 3 荧光 PCR 鉴定不同策略去除气溶胶的效果